Рекомендации по забору и доставке биоматериала

Рекомендация по забору проб для выявления вирусов гриппа.

Выписка из ИНСТРУКЦИИ по применению набора реагентов для выявления РНК вирусов гриппа А (influenza virus A) и гриппа В (influenza virus B) в биологическом материале методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией "АмплиСенс Influenza virus A/B-FL":

"ВНИМАНИЕ! Мазки со слизистой носоглотки и ротоглотки рекомендуется совмещать в одной пробирке и исследовать как один образец. Для этого берут мазки разными зондами сначала со слизистой нижнего носового хода, а затем из ротоглотки, при этом рабочие концы зондов после взятия мазков у пациента помещаются в одну пробирку с 0,5 мл транспортной среды для хранения и транспортировки респираторных мазков и исследуются как один образец."

Правила взятия, транспортировки и хранения сыворотки крови для проведения

иммуноферментного анализа, иммуноблотинга, ПЦР

      1. Забор крови производят натощак или не ранее чем через 3 часа после приема пищи из локтевой вены.

      2. Для получения и отделения сыворотки рекомендуется использовать для взятия крови вакуумные пробирки с гелем. (Приказ  МЗ Челябинской области № 899 от 10.08.2009 г). Пробирки с гелем можно отличить по желтой или красной крышке с желтым кольцом.

            Для лучшего отделения сгустка крови от сыворотки в пробирки добавлен гель - специальный материал, предназначенный для образования стойкого барьера между клеточными компонентами крови и сывороткой во время центрифугирования. Специфический удельный вес геля подобран таким образом, что при центрифугировании гель "всплывает" над эритроцитами и располагается между форменными элементами крови и сывороткой. Гель твердеет, и образуется барьер между форменными элементами крови и сывороткой. Устойчивый барьер образуется через 5 минут после окончания центрифугирования пробы. В пробирку с гелем добавлен кремнезем (активатор свертывания), который обеспечивает полное свертывание крови в течение 30 минут.

При использовании пробирок с гелем:

1) увеличивается выход образца (сыворотки);

2) сокращается время проведения анализа;

3) возможно проведение анализа, хранение и транспортировка образца в первичной пробирке. Пробирки можно замораживать до минус 20 градусов;

4) снижается вероятность гемолиза после центрифугирования;

5) снижается присутствие латентного фибрина в сыворотке;

6) отсутствует воздействие на пробу факторов окружающей среды (микроорганизмы, окисление и т.д.), что в конечном итоге повышает качество исследования.

            3. Методика взятия крови с помощью вакуумной системы

1. Пробирка маркируется, с указанием Ф.И.О. пациента гелевой ручкой или перманентным маркером.

2. Держа иглу рукой за цветную часть, снять белый защитный колпачок, закрывающий второй конец иглы в резиновом клапане.

3. Ввернуть этим концом иглу в держатель, а затем снять с нее цветной колпачок.

4. Провести пункцию вены из  руки, опущенной вниз, как это обычно делается с помощью шприца.

5. Фиксируя держатель левой рукой, вставить вакуумную пробирку  в держатель и движением правой руки , напоминающим проталкивание поршня в шприце, ввести пробирку в держатель до прокалывания пробки. Если пункция вены была проведена правильно, кровь начнет поступать в пробирку сразу же после ее установки в держатель до полного заполнения дозированного объема вакуума. Если был наложен жгут, его необходимо снять сразу же после начала поступления крови в пробирку.

6. После прекращения тока крови в пробирку ее необходимо извлечь из держателя. Пробирку легче извлекать, если большой палец правой руки упирается в выступ держателя.

7. Если нужно набрать несколько пробирок для разных анализов, вакуумную пробирку можно легко заменить на следующую. Резиновый клапан на игле препятствует вытеканию крови. Сразу же после взятия крови в вакуумную пробирку  с добавками -ее следует несколько раз перевернуть( 5-6 раз), не встряхивая, для лучшего перемешивания крови с реактивом.

8. После взятия проб иглу, не вынимая из держателя, следует сбросить в контейнер для использованных острых предметов.  

9. Провести центрифугирование проводится не ранее, чем через 30 мин. после забора крови из вены в лечебном учреждении.  Условия центрифугирования: 1500-2000g в течение 10 мин. Если количество оборотов меньше, чем необходимо, гель не поднимется по стенкам пробирки и не будет выполнять роль разделительного элемента. Пробирки с гелем нельзя центрифугировать повторно, так как это может вызвать гемолиз.

            В лабораторию направляется не менее 1,5 мл сыворотки.

            Время доставки  сыворотки в лабораторию не более 1 суток. 

            До доставки  в лабораторию сыворотка должна храниться при температуре + 4 - +6С^о.

4. Оформление направления

Текст направления и маркировка на флаконе должны быть написаны аккуратным,  легко читаемым почерком.

Высылается один экземпляр направления, заполненный в соответствии с приказом №513 Управления здравоохранения администрации города Челябинска от 28.12.2012 года.

                       5. Доставка материала в лабораторию

            1.Вакуумные пробирки с сывороткой помещаются в  контейнер  с  ячейками (штатив) и доставляются  в лабораторию в емкостях (вторичный контейнеры, стерилизационные коробки и др.) с закрывающимися крышками из материала, который не портится при дезинфекции. Дно контейнеров должно быть покрыто адсорбирующим материалом (марлевой салфеткой, ткань, вата и пр.) с дезинфектантом. Вторичный контейнер должен быть промаркирован знаком "Биологическая опасность".           

            2. Перевозка материала в сумках, портфелях и других предметах личного пользования не допускается.

            3. Направления  упаковывают в полиэтиленовый  пакет, который  укладывают в отдельный отсек контейнера.

Правила взятия, транспортировки и хранения плазмы

 для проведения

количественного определения ДНК/РНК (вирусной нагрузки) возбудителя гепатита В/С методом ПЦР

1. Забор крови производят натощак или не ранее чем через 3 часа после приема пищи из локтевой вены.

            2. Для получения и отделения сыворотки рекомендуется использовать для взятия крови вакуумные пробирки с ЭДТА. (Приказ  МЗ Челябинской области № 899 от 10.08.2009 г). Пробирки с ЭДТА можно отличить по сиреневой крышке . Применение гепарина в качестве антикоагулянта не допускается.

            3. Методика взятия крови с помощью вакуумной системы

1. Пробирка маркируется, с указанием Ф.И.О. пациента гелевой ручкой или перманентным маркером.

2. Держа иглу рукой за цветную часть, снять белый защитный колпачок, закрывающий второй конец иглы в резиновом клапане.

3. Ввернуть этим концом иглу в держатель, а затем снять с нее цветной колпачок.

4. Провести пункцию вены из  руки, опущенной вниз, как это обычно делается с помощью шприца.

5. Фиксируя держатель левой рукой, вставить вакуумную пробирку  в держатель и движением правой руки , напоминающим проталкивание поршня в шприце, ввести пробирку в держатель до прокалывания пробки. Если пункция вены была проведена правильно, кровь начнет поступать в пробирку сразу же после ее установки в держатель до полного заполнения дозированного объема вакуума. Если был наложен жгут, его необходимо снять сразу же после начала поступления крови в пробирку.

6. После прекращения тока крови в пробирку ее необходимо извлечь из держателя. Пробирку легче извлекать, если большой палец правой руки упирается в выступ держателя.

7. Если нужно набрать несколько пробирок для разных анализов, вакуумную пробирку можно легко заменить на следующую. Резиновый клапан на игле препятствует вытеканию крови. Сразу же после взятия крови в вакуумную пробирку  с добавками -ее следует несколько раз перевернуть( 5-6 раз), не встряхивая, для лучшего перемешивания крови с реактивом.

8. После взятия проб иглу, не вынимая из держателя, следует сбросить в контейнер для использованных острых предметов.  

9. Провести центрифугирование проводится не ранее, чем через 30 минут после забора крови из вены в лечебном учреждении. 

Условия центрифугирования: 1500g в течение 20 мин.

            В лабораторию направляется не менее 1,5 мл плазмы.

            Время доставки  плазмы в лабораторию не более 1 суток.  При отсутствии возможности немедленного ПЦР-анализа образец крови хранится в холодильнике при температуре + 2 - +8° С не более 2-х суток Замораживание образцов не допускается.   

4. Оформление направления

Текст направления и маркировка на флаконе должны быть написаны аккуратным,  легко читаемым почерком.

Высылается один экземпляр направления, заполненный в соответствии с приказом №513 Управления здравоохранения администрации города Челябинска от 28.12.2012 года.    

            5. Доставка материала в лабораторию

            1.Вакуумные пробирки с плазмой помещаются в  контейнер  с  ячейками (штатив) и доставляются  в лабораторию в емкостях (вторичный контейнеры, стерилизационные коробки и др.) с закрывающимися крышками из материала, который не портится при дезинфекции. Дно контейнеров должно быть покрыто адсорбирующим материалом (марлевой салфеткой, ткань, вата и пр.) с дезинфектантом. Вторичный контейнер должен быть промаркирован знаком "Биологическая опасность".          

            2. Перевозка материала в сумках, портфелях и других предметах личного пользования не допускается.

            3. Направления  упаковывают в полиэтиленовый  пакет, который  укладывают в отдельный отсек контейнера.

Критерии для отказа приема проб:

1. Пробы, собранные в несоответствующие транспортные контейнеры или содержащие несоответствующие консерванты:в случае взятия материала в несоответствующие пробирки или содержащие несоответствующие консерванты, которые могут привести к ошибочным результатам.

2. Недостаточное количество материала:  при получении недостаточного количества биологического материала (моча, кровь и т.д.) необходим повторный забор, учитывая правила забора, при котором необходимо взять достаточный объем материала для исследования. Если возникли сложности при обработке приносного материала для исследования (соскоб, ликвор, кровь и др.) то в этом случае оповещается врач, проводивший забор пробы и вместе с ним устанавливаются необходимые исследуемые лабораторные параметры.

3. Неправильно отобранные образцы:при получении материала, отобранного в несоответствии с проводимыми исследованиями (например, слюна вместо соскоба или моча для анализов крови и т.д.), его оформляют в бракеражный журнал. МО, где проводилось взятие материала, предлагают провести повторный забор проб.

4. Неправильно транспортированные или хранившиеся пробы:если время транспортировки материала в лабораторию превышает допустимый интервал времени согласно требованиям, которые предоставляют производители реагентов. Также оформляются в бракеражный журнал и биологические материалы, которые нуждаются в охлаждении, а транспортировались при комнатной температуре, также как и пробы, нуждающиеся в заморозке, а доставленные в лабораторию в размороженном виде.

5. Гемолизированные пробы:некоторые исследования являются некорректными при наличии гемолиза in vitro. При гемолизе сыворотки предлагается провести повторный забор материала. Информирование врача, который направил материал, особенно в случае тяжелых госпитализированных пациентов, является обязательным с целью исключения редких случаев гемолиза in vivo.

ПОСУДА, ИСПОЛЬЗУЕМАЯ ДЛЯ ДОСТАВКИ ПРОБ В ЛАБОРАТОРИЮ МБУЗ ДИАГНОСТИЧЕСКИЙ ЦЕНТР.

10.Ссылки

Методические указания МУ 4.2.2039-05 "Техника сбора и транспортирования биоматериалов в микробиологические лаборатории"

Санитарные правила СП 1.2.036-95 «Порядок учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I-IVгрупп патогенности»

Санитарные правила СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами III-IVгрупп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных заболеваний».

Санитарные правила СП 1.3.2518-09 «Дополнения и изменения №1 к санитарно-эпидемиологическим правилам «Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней. СП 1.3.2322-08»

СанПиН 2.1.3.2630-10 «Санитарно-эпидемиологические требования к организациям, осуществляющим медицинскую деятельность»

СанПиН 2.1.7.2790-10«Санитарно-эпидемиологические требования к обращению с медицинскими отходами»

Приказ МЗ СССР от 22 апреля 1985 г. N 535 "Об унификации микробиологических (бактериологических) методов исследования, применяемых в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений".

Приказ МЗ и МП РФ от 19 января 1995 г. N 8 "О развитии и совершенствовании деятельности лабораторий клинической микробиологии (бактериологии) лечебно-профилактических учреждений".